ANCA是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体，1982年由Davies等人首先发现，但直到1985年认识到它与原发性小血管炎的联系后才于临床受到重视。以乙醇固定的正常人中性粒细胞为底物，应用间接免疫荧光法检查，van der Woude等人发现重症WG（即GPA）患者血清中存在着胞浆型ANCA，即cANCA；Savage等人随后又发现MPA患者血清中存在着另一种ANCA——环核型ANCA，即pANCA。20世纪80年代后期的大量研究证实，ANCA化验对上述原发性小血管炎的诊断具有重要意义。20世纪90年代初期，随着ANCA特异性靶抗原的发现，用此特异抗原进行ELISA检查ANCA即应运而生，并逐渐成为国际通用的检查方法。

IIF法是最先应用且目前仍常应用的经典ANCA检测法。应用乙醇固定的白细胞可产生两种荧光形态：在胞浆中成粗大颗粒状、不均匀分布者称为cANCA，荧光沿细胞核周围呈线条状分布者称为pANCA。

应用IIF法时应注意：①应选用健康人肝素抗凝的外周血分离白细胞，其中除ANCA的靶细胞中性粒细胞和单核细胞外，还应包括淋巴细胞和嗜酸性粒细胞，后两者可作为内参照物。淋巴细胞可用来判断自身抗体是否为中性粒细胞和单核细胞所特异，从而帮助鉴别pANCA和ANA：pANCA只识别中性粒细胞和单核细胞，而ANA则同时还识别淋巴细胞的细胞核。嗜酸性粒细胞可帮助判断荧光强度及判断制片是否成功。嗜酸性粒细胞内有粗大均匀一致的颗粒，在紫外光激发下可产生暗黄绿色的均匀一致的自发荧光，由此可以帮助判断制片是否成功，细胞形态是否满意；以嗜酸性粒细胞的自发荧光为基础，并与其比较，可确定ANCA荧光亮度。②每次检测均应设阴性对照、cANCA和pANCA的阳性对照，并两人双盲读片来判断结果。目前已有商品化的试剂盒，操作简便，质量也多有保证。

IIF无法判定ANCA的特异靶抗原，已知cANCA主要靶抗原为PR3，pANCA主要靶抗原之一为MPO，但是两者均同时具有其他靶抗原，特别是pANCA。另外，pANCA和ANA很难区分，尤其当两者并存且ANA滴度较高时，可相互掩盖，难以鉴别，因此单独应用IIF法检测ANCA（特别是pANCA）并不可靠。目前部分商品化的IIF-ANCA试剂盒除含有中性粒细胞外，还同时配备了鼠肝切片或喉癌上皮细胞用以鉴别ANCA和ANA。

将特异性的抗原（如MPO、PR3等）直接包被于酶标板上，再检测血清中的抗体。随着ANCA特异性靶抗原逐一发现，这种方法在20世纪90年代得以迅速推广。由于不同抗原特异性的ANCA往往和临床上不同的疾病或临床综合征相关，抗原特异性ELISA则显示出其优点，该方法更敏感、更特异，可直接用于协助临床诊断和分类，在指导治疗、判断复发上意义重大。

用纯化抗原包被酶标板时，不可避免地会影响蛋白质分子三维结构，而抗PR3抗体和抗MPO抗体均主要识别抗原的三维立体构像，因此，可能影响试验敏感性。为克服这一缺点，目前检测抗PR3抗体已常用夹心ELISA法。该方法首先以纯化的抗PR3单克隆抗体作为固相蛋白包被酶标板，然后加纯化的PR3或含有PR3的粗抗原，实际上相当于将PR3在酶标板上亲和层析并保持了其蛋白质的立体构像。国内外研究均证明夹心ELISA法检测抗PR3抗体的敏感性更高。

ANCA是诊断AAV的重要指标，特异性、敏感性均较好。晚近欧洲多中心联合研究结果证实，如cANCA合并抗PR3抗体阳性或pANCA合并抗MPO抗体阳性，则诊断AAV的特异性可以达到99%。

关于ANCA对于判断病情的活动性和复发的价值目前还存在广泛争议，部分ANCA阳性的患者在疾病进入缓解期后ANCA滴度虽有下降，但仍然长期维持阳性。最近一项针对156名AAV患者的多中心前瞻性研究发现，ANCA水平的变化与病情缓解或复发无关。因此，目前认为，ANCA虽然是AAV的特异性诊断学指标，但单凭其水平的高低变化不足以判断疾病的活动性和进行治疗决策。