高效阳离子交换色谱法测定考来维仑干混悬剂中的7种杂质

薛景岩¹，李志伟^1,2，原现瑞³

（1．河北科技大学化学与制药工程学院，石家庄 050000；2．河北省国家生物培训基地，石家庄 050000；
3．河北省分析测试研究中心，石家庄 050000）

医学上将血脂过高称作高脂血症，指各种原因而导致血浆中胆固醇和/或甘油三酯水平升高^[1]。高脂血症是动脉粥样硬化的主要发病原因之一，与心脑血管疾病的发生直接相关，常用血脂调节药主要有他汀类、贝特类、烟酸类、胆酸螯合剂类等^[2]。

考来维仑（Colesevelam）是新型的血脂调节药胆酸螯合剂类药物，它具有离子交换树脂的作用，与胆酸的亲和力强^[3]。考来维仑是1-氯-2,3-环氧丙烷，［6-(丙烯氨基)-己基］三甲胺氯化物和N-烯丙基癸胺氯化物的烯丙胺多聚体^[4]。考来维仑是具有亲水性而又不溶于水的聚合物，对其质量进行控制一直是个难题，特别是相关杂质的控制。本文针对考来维仑干混悬剂中存在的七种相关杂质（包括工艺杂质和降解杂质），采用两种不同的高效阳离子交换色谱法方法对它们进行定量分析，试验结果表明，两种方法可简便、灵敏、准确的测定7种相关杂质。

1　材料与方法

1.1　仪器

Dinoex RFIC ICS-2000 色谱系统（美国戴安），采集和处理采用Chromeleon色谱工作站；AL204电子天平（梅特勒）

1.2　试剂

考来维仑干混悬剂，空白辅料以及七种相关杂质由石药集团提供，七种相关杂质命名为CS0～CS4，CS6和CS7，其他试剂均采用分析纯以上化学试剂，蒸馏水是自制高纯水。

1.3　溶液的配制

1.3.1　方法Ⅰ

流动相：4.0mmoL/L的硝酸-乙腈（6 : 4，体积比）；稀释剂：10mmoL/L的盐酸-乙腈（7 : 3，体积比）。

系统适用性溶液：精密称取5.0mg各杂质对照品（即CS0、CS2、CS6和CS7）置50ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度。量取5ml该溶液，用稀释剂稀释至100ml。

标准溶液：精密称取5.0mg CS2杂质对照品置50ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度。精密量取该溶液5ml置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度。

样品溶液：精密称取样品（约相当于盐酸考来维仑100mg）置小烧杯中，精密加入10ml稀释剂，搅拌30min，过滤。

1.3.2　方法Ⅱ

流动相：5.0mmol/L硝酸-丙酮-乙腈（5.1 : 4.5 : 4，体积比）；稀释剂：15mmol/L的盐酸-乙腈（7 : 3，体积比）。

系统适应性溶液：精确称取约5mg各杂质对照品（即：CS1、CS3、CS4）置50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，量取5ml此溶液用稀释剂稀释到100ml。

标准溶液：精密称取5mg CS1杂质对照品置50ml容量瓶中。用稀释剂溶解并稀释至刻度。精密量取该溶液5ml置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度。

样品溶液：精密称取样品（约相当于盐酸考来维仑100mg）置小烧杯中，精密加入10ml稀释剂，搅拌30min，过滤。

1.4　色谱条件

操作规程按照离子色谱法测定法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ J）执行；色谱柱：Metrosep C4-250/4.0，Metrosep C4 Guard/4.0；检测器：电导检测器；流速：0.9ml/min；进样量：100μl；柱温：30℃。

2　方法学验证

2.1　系统适用性

精密量取系统适用性溶液100μl注入液相色谱，记录色谱图，考察各杂质的分离度；精密量取标准溶液100μl注入液相色谱，重复进样6次，获得的杂质峰的峰面积，考察精密度。结果：方法Ⅰ中各个杂质的出峰顺序依次为CS7、CS2、CS0、CS6。各杂质峰之间均能有效分离，分离度符合规定。CS2杂质峰峰面积的相对标准偏差为0.2%，符合要求；方法Ⅱ中各个杂质的出峰顺序依次为CS3、CS1、CS4。CS1杂质峰峰面积的相对标准偏差为1.1%，符合要求。两种方法对应的系统适用性色谱图分别为图1、图2。

2.2　专属性

按照中国药典规定的实验方法^[5]，对考来维仑干混悬剂进行强制降解试验，采用强酸、强碱、氧化、高温和强光等剧烈条件进行加速破坏试验后进行有关物质检测，同时对空白辅料进行破坏，考察检测方法的专属性。结果：方法Ⅰ中本品在酸、碱、氧化、光照的强制破坏试验中未产生明显的降解杂质；在高温及氧化破坏试验中，已有杂质稍有增大，未产生新的降解杂质；试验结果未发现对特定杂质CS7、CS2、CS0、CS6产生干扰的杂质，且空白辅料对特定杂质CS7、CS2、CS0、CS6的检测没有产生影响；方法Ⅱ中本品在酸、碱、高温、氧化、光照等条件下进行强制破坏，除样品本身的杂质CS1及CS3外，只有高温破坏条件下产生一新的降解杂质。各杂质均能有效分离，辅料和溶剂对特定杂质CS3、CS1、CS4的检测没有影响。故采用这两种离子色谱法对考来维仑干混悬剂杂质进行检测专属性较高。

2.3　线性

将7种有机杂质CS0、CS1、CS2、CS3、CS4、CS6、CS7对照品分别配制成系列浓度的对照品溶液，分别进样分析，以各个杂质的浓度及相应的峰面积进行线性回归分析。结果见表1。

2.4　检测限

取CS0、CS2、CS6、CS7对照品适量，精密称定，加稀释剂溶解并逐级稀释，精密量取各稀释后的溶液100μl注入液相色谱仪，当信噪比为3 : 1时的浓度为检测限。结果见表2。

2.5　重复性与溶液稳定性

精密量取样品溶液100μl，连续进样6次，杂质峰面积的RSD小于10%，检测重复性良好，样品溶液稳定。

2.6　回收率

取按本品处方量混合的空白辅料粉末适量，精密称定，共9份，分别精密加入一定量的混合对照品储备液，制备成高、中、低3个浓度（分别相当于各杂质限度浓度的50%，100%，150%）的供试品溶液，每个浓度配制3份，分别进样测定，按外标法以峰面积计算各杂质含量，将所得含量与加入的标准量进行比较，计算回收率。各样品的回收率和RSD值分别为：CS7，102.46%，3.26%；CS2，101.23%，4.51%；CS0，99.80%，3.29%；CS6，101.43%，3.86%；CS3，99.36%，2.56%；CS4，102.14%，1.23%；CS1，103.64%，2.52%。符合验证要求，证明该方法准确度高。

2.7　耐用性

将色谱条件作微小变化（微调流速、柱温及流动相中硝酸浓度）后，测定结果基本不受影响，各杂质峰之间均能有效分离，表明方法耐用性良好。

3　结论

本文采用两种高效离子交换色谱法对考来维仑干混悬剂中的7种杂质进行定量分析，为考来维仑干混悬剂的杂质分析提供了分析方法和判断标准，能够更好的其进行合理有效的质量控制，从而提高考来维仑干混悬剂的生产工艺水平和内在质量。

参考文献

[1] 林肖惠, 王玉丽, 徐为人. 心血管病学进展, 2008, S1: 91-96.

[2] 陈敏, 郑璇, 黄旭慧. 福建医药杂志, 2009, 3: 130-132.

[3] 梁引库, 吴三桥, 徐仲阳.食品与发酵工业, 2012, 38(9): 94-98.

[4] 张伟, 任连杰, 周长明, 等. 中国生化药物杂志, 2014, 08: 170-175.

[5] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]. 北京: 化学工业出版社, 2010: 193.