凝胶渗透色谱法测定原料中聚乙二醇3350的含量

马博凯¹，勾新磊¹，刘蕊¹，史迎杰¹，牛夏梦¹，黄曌¹，周明强^1,2

赵新颖^1,2，刘伟丽^1,2

（1．北京市理化分析测试中心，有机材料检测技术与质量评价北京市重点实验室，北京 100089；
2．北京市科学技术研究院分析测试技术重点实验室，北京 100089）

便秘是临床上常见的慢性消化道症状，其发病率高，病因复杂，往往给患者带来许多痛苦和烦恼，严重影响其身体健康和生活质量^[1]。目前，老年人中便秘的发病率很高^[2]。便秘的诊断与治疗，已引起消化界关注。聚乙二醇3350（PEG）是治疗功能性便秘药物之一^[3]，一般添加包括Na⁺、K⁺、Cl⁻和等电解质，既具有缓泻功能，又可以保证在排便时重要电解质不流失^[4]。聚乙二醇3350是由氧化乙烯聚合而成的，在肠道内不被细菌分解代谢，分子量在3000以上时肠道几乎不被吸收^[5]，所以对人体无副作用。但是，目前药物质量问题一直备受关注，市场上药物质量参差不齐，总有不法分子偷工减料，以次充好，从中牟取暴利，药品达不到应有的疗效，耽误患者治疗最佳时机。因此，建立一个操作简便、可行性强的分析方法，检测原料中聚乙二醇3350的含量，对保障药物安全至关重要。本文建立了凝胶渗透色谱法（GPC），测定原料中聚乙二醇3350含量的检测方法。本法准确、简便、快速，为保障药物质量提供了科学指导和技术支持。

1　实验部分

1.1　仪器和试剂

Waters 1525液相色谱仪配有2414型示差折光检测器（美国Waters公司）；XS204分析天平，瑞士Metller Toledo公司；Millipore 超纯水仪；聚乙二醇3350标准品（澳大利亚Sigma公司）；实验用水为经 Millipore 净化系统（0.22µm滤膜）过滤的去离子水；甲醇为色谱纯，美国Fisher公司；样品原料由某公司提供。

1.2　实验条件

色谱柱：Shodex SB-806M HQ；聚羟基甲基丙烯酸酯为基质的凝胶渗透色谱柱（8.0mm× 300mm，13μm）；流动相：0.1mol/L硝酸钠-乙腈（4 : 1），等度洗脱；柱温35℃；进样体积40μl。

1.3　标准溶液的配制

准确称取标准品，用超纯水溶解并定容，制成系列标准工作溶液。

1.4　样品处理

将700mg左右的样品置于100ml容量瓶中，超纯水溶解定容，取10ml置100ml容量瓶中，超纯水定容，过0.22µm上机。

2　结果

2.1　色谱柱的选择

采用Shodex系列下3个排阻极限不同的凝胶渗透色谱柱SB-802.5、SB-803、SB-806M HQ进行分析，结果表明：使用SB-802.5型色谱柱时主峰峰型较差。使用SB-803型色谱柱中时基线不稳定。使用SB-806M HQ型色谱柱时，主峰峰形良好，基线稳定。分离结果如图1所示，因此选用SB-806M HQ型色谱柱对聚乙二醇3350进行分析。

2.2　流动相的选择

比较分析了超纯水、0.1mol/L 硝酸钠、0.1mol/L 硝酸钠-乙腈（4 : 1，体积比）作为流动相对分离聚乙二醇3350的分离影响。结果表明，使用超纯水和0.1mol/L硝酸钠作为流动相时，色谱主峰脱尾较严重，影响定量结果准确性，而使用0.1mol/L硝酸钠-乙腈（4 : 1，体积比）作为流动相时，峰形效果好，所以本研究选择0.1mol/L硝酸钠-乙腈（4 : 1，体积比）作为流动相。

2.3　重现性实验

平行配制6份浓度大约是0.74mg/ml对照溶液，测定6份聚乙二醇3350主峰的峰面积相对标准偏差，计算结果是0.73%，说明该实验重现性好。

2.4　线性方程及相关系数

准确称取标准品37.0mg、52.8mg、58.4mg、74.6mg、91.5mg、146.4mg、220.0mg置100ml容量瓶中，超纯水定容，以待测物的峰面积（Y）和相应质量浓度（X，mg/ml）建立标准曲线，并进行线性回归计算，得到线性方程为Y=415226X+2165.7和相关系数R²=0.9998。结果说明，聚乙二醇3350在0.37～2.2mg/ml范围内，线性关系良好，线性相关系数大于0.99，本法适用于原料中聚乙二醇3350的定量分析。

2.5　回收率

在样品中分别添加不同浓度的标准品溶液，进行加标回收率和精密度实验。在样品添加水平分别为样品含量的80%、100%、120%，平行6次。结果表明，待测物的平均回收率为98.66%～103.84%，相对标准偏差为1.21%～1.61%，能满足聚乙二醇3350含量测定的要求。

2.6　样品测定

利用本方法对某公司送来原料样品进行含量测定，按照1.4进行前处理，按照1.2条件进行测定，测试结果总含量均大于94%。样品色谱图见图2，测试结果见表1。

3　结论

本文建立了凝胶渗透色谱法检测聚乙二醇3350的含量的分析方法。本方法简单、重现性好、低成本，为监控药品聚乙二醇3350含量提供了技术依据。

参考文献

[1] 覃荣, 刘洪明, 詹丽杏, 等. 云南中医中药杂志, 2009, 30(12): 66-68.

[2] 林芬丹, 熊哲锟, 戈焰. 世界中医药, 2009(2): 112-114.

[3] 张秋瓒, 杨华. 中国全科医学, 2005, 18(2): 129-130.

[4] 王惠吉, 梁晓梅, 于中麟, 等. 中国新药杂志, 2002, 11(6): 483-486.

[5] 郑昌爱, 项贤者, 姜俊. 海峡药学, 2011(4): 119-120.