- 胃肠肝胰肿瘤淋巴系统解剖与临床
- 王云祥 王锡山主编
- 570字
- 2021-04-16 17:14:16
二、 淋巴管免疫组织化学染色法
淋巴管免疫组织化学染色同常规免疫组织化学染色方法一样,只是一抗需选择淋巴管较特异、敏感的标记分子。主要过程操作如下:冷冻切片、涂片或单层细胞培养物按要求进行固定,石蜡切片常规脱蜡、水化组织;然后3% H 2O 2室温孵育5~10分钟,阻断内源性过氧化物酶;抗原修复(热修复或酶消化修复);按一抗要求,对组织进行预处理后,进行孵育,37℃ 30~60分钟或4℃过夜;按二抗试剂盒要求操作加入二抗;显色,复染、脱水、透明、封固。注意每一步骤之间用缓冲液冲洗和一抗的作用浓度。
为了证明抗体的特异性和实验操作的规范性,免疫组化实验必须有空白对照和阳性对照;此外,为了比较和区分淋巴管和血管,常采用连续切片分别标记淋巴管和血管,或者进行双染,也可进行免疫荧光染色。
淋巴管内皮细胞特异性标志物的发现和使用,使免疫组织化学显示淋巴管成为可能,并成为淋巴管研究的重要手段。近年来张雅芳等(2007~2011)在淋巴管的定性和定位研究中应用了上述淋巴管标记物VEGFR-3和Podoplanin标记了人结肠癌组织淋巴管,用LYVE-1标记了人恶性黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌及移植瘤模型组织淋巴管,用D2-40标记了人卵巢癌、甲状腺癌、乳腺癌和肺癌等组织淋巴管(图3-24,25)。
图3-24 人结肠癌组织淋巴管(免疫组织化学染色× 100)
↑示毛细淋巴管
图3-25 人甲状腺癌组织淋巴管(免疫组织化学染色× 200)
箭头示D2-40阳性的淋巴管;☆示血管