第七节 淋巴管透射电镜观察法

从20世纪80年代以来,人们用透射电镜研究淋巴管的超微结构,取得很大的进展。此外,用前述各种方法在光镜下观察的结果,有时也需在透射电镜下,根据淋巴管的超微结构特点做进一步的确认和探讨。
首先制作半薄切片,动物麻醉后,用0.9%盐水冲洗血管,至小血管接近白色为止。然后用2%多聚甲醛和3%戊二醛固定,继续用0.1M磷酸缓冲液冲洗。为区分淋巴管和血管,也可由动脉注入加0.2%~0.3%墨汁的生理盐水,至器官表面稍呈现黑色为止。然后取材,用戊二醛和锇酸进行双重固定,脱水,用国产环氧树脂618或Epon812包埋,制作0.5~1μm的半薄切片,用甲基-天青染液和碱性复红染液染色,在光镜下观察,根据毛细淋巴管和淋巴管的管壁薄、管径大且不规则,以及管腔内无墨汁颗粒特点,来与毛细血管及小静脉相区别(图3-16,17)。然后将确认为存有毛细淋巴管及淋巴管的部位做超薄切片,用醋酸双氧铀和枸橼酸铅进行电子染色,透射电子显微镜下观察,进一步确认毛细淋巴管和淋巴管,并观察其超微结构的特点(图3-18,19)。根据我们对很多器官淋巴管的观察,在半薄切片上,毛细淋巴管和淋巴管的形态结构特点显示最为明显,再结合超薄切片透射电镜的观察,完全可以取得客观准确的研究结果。
图3-16 家兔卵巢黄体内的淋巴管(半薄切片× 132)
1.毛细淋巴管;2.淋巴管;3.小血管
图3-17 家兔小肠黏膜层的淋巴管(半薄切片× 132)
1.毛细淋巴管;2.毛细血管(充有墨汁);3.小血管(充有墨汁)
图3-18 家兔卵巢毛细淋巴管的超微结构
1.毛细淋巴管腔;2.内皮细胞核;3.胶原纤维× 5000
图3-19 家兔卵巢毛细淋巴管的超微结构
1.毛细淋巴管腔;2.插入连接;3.胶原纤维× 20 000