血小板是血液有形成分中比重最轻的一种血细胞，利用较大的比重差，用离心法可以从全血中分离提取较浓、较纯的血小板制品。主要品种有浓缩血小板、去白细胞血小板、混合血小板、洗涤血小板和辐照血小板等。

目前有两种方法制备血小板：手工从献血者采集的全血中分离制备及用全自动血细胞分离机单采血小板。本节主要介绍手工法制备各种血小板制剂。

手工制备的浓缩血小板是从已采集的全血中经离心分离制成，也称随机供者血小板。

分浆夹、塑料夹、止血钳、分离架、离心机、血液成分分离机。

1.多联袋采集后在室温保存和运输6小时内的全血，或采集后在（22±2）℃保存和运输24小时内的全血。

2.以下全血不可制备血小板

（1）200ml全血采集时间＞5分钟，300ml全血采集时间＞7分钟，或400ml全血采集时间＞10分钟，所采集的全血不可用于制备血小板。

（2）去除白细胞的全血。

（3）保存于（4±2）℃的全血。

（1）全血“轻离心”：离心力1220g离心5分钟或700g离心10分钟，（22±2）℃，使红细胞下沉，血小板因比重较小而绝大部分保留于血浆中，为富含血小板血浆层。

（2）富含血小板血浆分离转移

1）从离心杯中取出血液，避免振动，挂在分浆架上，静置30分钟以上；用胶圈将配血导管捆扎在第1转移空袋；在第2空袋的转移管上塑料夹。

2）目视血浆和红细胞分层是否清楚、有无溶血、气泡、重度乳糜、色泽异常，血袋和管道是否完好；如符合要求则将固定在转移袋的配血导管掰断。

3）把血液置于分浆夹上分离富含血小板血浆入第1转移空袋；在富板浆袋管道上止血钳；松开止血钳，将血浆袋内的空气排入红细胞袋。

4）悬浮红细胞：折断红细胞保存液阻塞管，将红细胞保存液转移至红细胞袋内，在红细胞袋出口管约1/3处上止血钳，轻轻摇动使红细胞与保存液混匀。

5）在富含血小板血浆袋出口处加上塑料夹。

6）导管热合。

（3）富含血小板血浆“重”离心：温度（22±2）℃，以离心力4305g离心8分钟，使血小板下沉于底部形成沉淀。

（4）分离血小板：上清血浆可制备冰冻血浆，沉淀物即为浓缩血小板。将离心后的富板浆袋置于分浆夹，将上层的血浆转移至已空转移袋，留取适量血浆及沉淀物即为浓缩血小板；制成1袋浓缩血小板和1袋血浆。

（5）称量浓缩血小板、血浆

1）血小板容量标准：来源于400ml全血，容量为50～76ml；来源于200ml全血，容量为20～30ml。

2）血浆容量标准：标示量±10%。

（6）热合导管，信息录入。

（7）血浆速冻为冰冻血浆，血小板（22±2）℃振荡保存。

（1）将全血采集于四联袋主袋内，（22±2）℃保存。

（2）全血“重”离心：将采血后的四联袋，置（22±2）℃温度离心，以离心力4305g离心10分钟。

（3）把离心后的主袋置于分浆夹内，先将大部分血浆分入第2袋，然后将白膜层（含有血小板、白细胞和少量红细胞层）挤入第3袋，再从第2袋分出适量血浆至第3袋；夹住第2、3袋间的塑料管。

（4）将第4袋内红细胞保存液加入主袋内，使之与主袋内红细胞混匀，热合主袋与第4袋间的塑料管，为悬浮红细胞。

（5）白膜“轻”离心：将第3、4袋置于（22±2）℃下，以离心力1140g离心10分钟。

（6）第3袋上层悬液分入第4袋即得浓缩血小板。单位及容量同PRP法。

（7）信息录入。

以LMB-SEPAMATIC-SL全自动血液成分分离机为例。开机时，确保成分分离机设备上没有任何血袋或导管，按提示点击确定进入设备初始化；以400ml全血为例，根据不同的制备方法选择相应操作。

（1）全血“重”离心：离心力2100g、时间14分钟、温度20～24℃、刹车9. 4。

（2）离心后轻轻将全血袋挂上已初始化的全自动血液成分分离机，点击“程序”→“程序选择”，选择“悬红+新浆+白膜”程序，点击“开始”，出现执行分离程序，按照挂袋导航提示挂好血袋及导管。操作员和献血员条码扫描完成后程序自动开始执行分离红细胞、血浆及白膜（目视有脂肪血、溶血、渗血等情况均停止下一步加工）；程序结束时，提示进行导管热合、断袋（根据实际情况选择热合卡钳），如不需要热合导管，按“完成”打开卡钳（注意：在点击“完成”打开卡钳之前，请使用卡子将血浆导管卡好）。

（3）保存数据完成操作：取出红细胞、血浆和白膜血袋，程序执行完毕。

（4）白膜“轻”离心：离心力280g、时间10分钟、温度20～24℃、刹车9. 4。

（5）分离血小板：将白膜的血袋轻放于分浆夹上，然后松开导管卡钳，分离上层血小板血浆至空袋，血小板约70ml（2U血小板），含空袋重量范围应在80～100g之间。

（6）断开血小板袋与残留红细胞袋，同时将其配管（至少15cm）粘贴至注满血小板的导管上，导管至少保留15cm；再一次核对配管与血小板袋上的献血条形码，确保其一致。

（7）成品粘贴标签，信息录入，交库。

（1）全血“轻”离心：离心参数为离心力1140g，时间8分钟，温度20～24℃。

（2）上机分离

1）将离心后的血液轻轻取出（目视有脂肪血、溶血、渗血情况均停止下一步加工），避免振荡，依次将母袋，红细胞保养液袋及转移袋挂入全自动血液成分分离机相应的挂杆上，并确保所有导管完全卡入相应的卡钳内。

2）点击“程序”键进入程序选择界面后，选择“悬浮红细胞+富含血小板血浆”的血液分离程序；折断母袋及红细胞保养液袋上的易折二通。

3）点击屏幕上的“开始”，用扫描枪依次扫描操作人员工号条形码、产品条形码及献血条形码，按提示点击“下一步”进行操作，直至分离程序完成。

4）程序结束时，先将导管上所有卡夹夹闭，再根据提示进行导管热合，如不需要热合导管，按“完成”打开卡钳。

5）热合完成，将出现称重界面。点击“确定”，完成操作。取出各部位血袋，程序执行完毕。

（3）将分离完成的悬浮红细胞及血浆从成分分离机中取出，断开红细胞袋，即为2U悬浮红细胞。

（4）将血浆袋与空转移袋进行二次离心，离心参数为离心力4305g，时间8分钟，温度20～24℃。

（5）离心后，将血小板袋及空袋重新挂在成分分离机上，血浆袋及导管置于A卡钳及相应的挂杆上，空转移袋及其导管置于D卡钳及相应的挂杆上。

（6）点击屏幕上的“程序”键，进入程序选择界面后选择“血小板第二次离心”的血液分离程序；打开卡夹。

（7）点击屏幕上的“开始”，用扫描枪依次扫描操作人员工号条形码、产品条形码及献血条形码，并按提示点击“下一步”进行操作。

（8）程序结束时，再根据提示进行导管热合，热合完成，将出现称重界面；点击“确定”，完成操作；取出各部位血袋，程序执行完毕。

（9）断开血小板袋与血浆袋，同时将其配管（至少15cm）粘贴至注满血小板的导管上，导管至少保留15cm；再一次核对配管与血小板袋上的献血条形码，确保其一致。

（10）成品贴签、录入信息、交库。

1.浓缩血小板解聚、保存　由于制备中离心力的作用，血小板沉淀聚集成团，所以制备好的浓缩血小板置室温（22±2）℃静置1～2小时，待自然解聚后，轻轻摇匀血袋，制成浓缩血小板悬液，保存于（22±2）℃的血小板振荡器里。

2.将制备好的血浆速冻，保存于-20℃以下冰柜。

3.做好产品交接记录。

4.不合格血液的管理　按照规程进行报废处置。

详见本章第五节去白细胞血液。

混合浓缩血小板是采用特定的方法将2袋或者2袋以上的浓缩血小板汇合在同一血袋内。主要汇集方法有2种。

主要用于富含血小板血浆（PRP）法制备的浓缩血小板汇集，基本步骤如下。

1.浓缩血小板分类　将检验合格的浓缩血小板按血型分类放置。

2.同血型的浓缩血小板汇集　使用无菌接驳机将同一血型的浓缩血小板若干袋（如6 袋400ml全血制备的血小板）无菌接驳连接，将血小板汇集在一个血袋内。

3.混合血小板　将已汇集在同一血袋中的血小板混合摇匀。

4.标识留样　热合充满血液的血袋导管留取血样，血袋标识中注明汇集血小板的容量及汇集单位数。

5.信息录入，成品移交。

用白膜法制备混合浓缩血小板时，可使用此方法。

1.全血离心后分离出白膜。

2.将若干袋同一血型白膜汇入一个血袋中，加入适当血浆混匀后轻离心，将上清液分入血小板袋，即获得混合浓缩血小板。

3.按规程标识留血样。

一般用生理盐水、盐缓冲液加ACD-A或枸橼酸盐组成的洗涤液洗涤血小板。国内外推荐用手工或机械洗涤法。洗涤后血小板回收率为90%，血浆去除达95%，洗涤后血小板中的白细胞无显著性改变。洗涤后的血小板必须在4小时内输注。应注意血小板需解聚良好方能输注。

洗涤血小板主要去除血浆中对患者有害的抗体和引起输血小板不良反应的物质。

将血小板放入血液辐照仪，通过γ射线辐射血小板（详见本章第六节辐照血液成分制备）。

虽然目前我国还没有制定冰冻血小板的质量标准，但是有一部分血站，特别是一些边远地区血站仍在应用，对于基层医院抢救治疗具有较大的帮助。现将我国大部分血站使用的冰冻血小板制备方法介绍如下，供参考之用。

1.大容量低温离心机，要求离心机性能稳定，600～1000转时不出现明显共振。

2.超净工作台（100级），-80℃超低温冰箱、血细胞计数仪、全自动生化分析仪、pH计、分浆夹、热合机、血液称量仪、37℃循环式水浴箱和深低温冰箱等。

1.ACD抗凝剂保存的全血要求

（1）献血者符合健康标准，献血前一天没有饮含酒精饮料、两周内没有服用阿司匹林和其他抗血小板及抗凝血的任何相关药物。

（2）没有出、凝血疾病。

（3）外周血小板计数＞150×10 ⁹/L；全血采血时间＜3分钟，无明显脂血或溶血。

2.机采血小板未能及时发出时也可以制备成冰冻血小板。

1.符合上述要求的全血在6小时内分离制备血小板混悬液

（1）将采集的全血在（22±2）℃，离心力480g条件下离心7～10分钟。

（2）轻轻分离上层，得到血小板混悬液。

2.将放置在-70～-40℃冰箱内事先配好的75%二甲基亚砜（DMSO）取出，采用无菌技术加入血小板混悬液中，使DMSO在血小板混悬液中最终浓度为5%。

3.将血小板混悬液装盒后直接放入-80℃冰箱，在梯式金属架上进行冰冻降温，避免叠放，盒子之间保持3～5cm的空隙；在1. 5～2小时内完成冰冻降温过程，冰冻降温过程中各温度段、各部位都禁止温度回升。

4.待冰冻血小板的温度恒定后可以叠放，储运温度不得高于-40℃。

5.冰冻血小板有效期为1年。

6.输注前从-80℃冰箱中取出，在37℃循环式水浴箱中融化后尽快输注；如需要短时间保存，应置于（22±2）℃环境中，并适当振摇。